|
 |
Mikrodysekcja laserowa
Wraz z rozwojem nauki wzrasta zapotrzebowanie na systemy pozwalające wyizolować z preparatu pojedyncze komórki lub ich grupy do dalszych analiz w następujących dziedzinach:
- Patologia
- Biologia komórki
- Onkologia
- Medycyna sądowa
- Genetyka
- Immunologia
- Badania żywności
- Neurobiologia
- Diagnostyka prenatalna
- Mikrobiologia/wirusologia
Jakość i czystość pozyskanego materiału zależy od zastosowanej metodyki i precyzji użytych urządzeń. W laboratoriach, w których dokonuje się takich procedur na dużą skalę ważna będzie też automatyzacja i niezawodność systemu.
Najbardziej zaawansowane obecnie systemy opierają się na wycinaniu obiektów laserem zintegrowanym z zaawansowanym mikroskopem badawczym i stolikiem zmotoryzowanym. Całość uzupełniona jest systemem komputerowym pozwalającym sterować procesem wycinania poprzez oprogramowanie, kamerę i monitor komputerowy.
Takim profesjonalnym, zaawansowanym i wyrafinowanym systemem
jest SLµCUT. Charakteryzuje się prostą procedurą
i wyjątkową efektywnością.
SLµCUT stosuje wycinanie w technologii zimnego
lasera UV (około 350 nm), co gwarantuje niezawodny proces bez
wpływu temperatury czy promieniowania na preparat. Jest to laser
bezobsługowy o żywotności 10 000 godzin. Wiązka lasera
prowadzona jest przez obiektyw mikroskopu co daje dalsze korzyści
jakościowe. W mikrodysekcji SLµCUT korzysta się
z mikroskopu odwróconego i stolika zmotoryzowanego o dokładności
1mm. Dokumentację i przekazywanie obrazu na monitor zapewnia
3-chipowa kamera kolorowa wysokiej jakości z rzeczywistym interfejsem
video RGB co daje znakomity obraz. Cały sprzęt zajmuje tylko
tyle miejsca ile mikroskop i oczywiście komputer.
Dwa następne elementy techniczne istotne dla końcowego efektu
w opisywanej metodzie to sposób przygotowania preparatu oraz
mocowanie i podnoszenie wyciętych elementów. Zastosowane w SLµCUT
proste rozwiązania dają wycinki wolne od zanieczyszczeń i
umocowane w sposób ułatwiający dokumentację i dalsze analizy.
Pierwszy element to metalowa płytka wielkości szkiełka podstawowego
z wyciętym okienkiem, które pokryte jest specjalną membraną
- na niej umieszczana jest próbka. Drugi element to plastikowy
pojemnik z pokrywką klejącą, do której przyklejają się wycięte
wraz z membraną interesujące nas obiekty.
Poniżej przedstawiono opis metody:
- Próba jest umieszczana na płytce metalowej z okienkiem pokrytym membraną. Procedura nie różni się od nakładania na normalne szkiełko podstawowe. Używane mogą być wszystkie próby takie jak parafinowe, mrożone, rozmazy a nawet kultury komórkowe.
- Płytka z próbą umieszczana jest na szkiełku podstawowym. Membrana chroni próbkę od góry
- Płytka wraz ze szkiełkiem umieszczane są w specjalnym uchwycie na stoliku zmotoryzowanym mikroskopu.
- Komórki są zaznaczane na monitorze przy użyciu myszy komputerowej (pomyłki mogą być z łatwością korygowane). Doskonała jakość obrazu pozwala na dokładną identyfikację komórek.
- Laser całkowicie automatycznie wycinana komórki wraz z przylegającą membraną.
- Od góry do membrany przykłada się pojemnik z pokrywką klejącą. Brak bezpośredniego kontaktu pokrywki z próbą gwarantuje uniknięcie zanieczyszczenia.
- Wyodrębnienie komórek z preparatu odbywa się poprzez automatyczne podniesienie wyciętych fragmentów próbki wraz z odpowiednimi częściami membrany.
- Wyodrębnione komórki zostają zamknięte w pojemniku do dalszych badań. Jednocześnie pozostają przyklejone do pokrywki w określonej pozycji, która umożliwia dalszą inspekcję przy zastosowaniu mikroskopu.
Oprogramowanie pozwala na automatyczne obliczanie powierzchni, automatyczną dokumentację fotograficzną, określenie cztery różnych grup odmiennych typów komórek, stworzenie kont wielu użytkowników i pełną integrację modułu fluorescencyjnego.
Możliwe jest zeskanowanie preparatu , a jego przegląd może być pokazany w dolnym oknie programu i zachowany do celów dokumentacyjnych. Łatwo też przemieścić się w dowolną interesującą nas pozycję na preparacie poprzez wskazanie myszką. W sposób oszczędzający czas można zakreślić poszczególne komórki używając narzędzia rysującego okręgi. Można zaznaczyć 4 grupy obiektów czterema różnymi kolorami. W prawym dolnym oknie programu zachowuje się w tabeli informacje o zaznaczonych obiektach.
Każda grupa może być wycięta i wyodrębniona oddzielnie na innej pokrywce. Metoda ta pozwala oszczędzić czas np. przy wycinaniu komórek nowotworowych i materiału porównawczego
Przed i po procesie wycinania można przeprowadzić automatyczną dokumentację i zmierzyć obiekty niezależnie od używanego właśnie obiektywu.
System przewidziany jest do pracy na mikroskopie odwróconym
i choć może pracować na urządzeniach różnych firm, to Nikon
TE-2000 jest ze względu na swoją wszechstronność i modułowość
najbardziej przydatny do tej jak i innych zaawansowanych technik.
|
|
 |
